醫(yī)師實踐技能考試輔導(dǎo)：排斥反應(yīng)的免疫檢驗

　　排斥反應(yīng)發(fā)生時，受者體內(nèi)的免疫應(yīng)答將發(fā)生一系列變化，檢測機體免疫狀態(tài)可診斷或推測排斥反應(yīng)的發(fā)生。

　　一、體液免疫水平檢測

　　相關(guān)免疫指標(biāo)包括：AB0血型、其他血型和HLA抗體，以及抗供者組織細(xì)胞抗體、血管內(nèi)皮細(xì)胞抗體、冷凝集素抗體等。測定方法可以根據(jù)相應(yīng)抗原的特性，采取各種交叉配型、補體依賴的細(xì)胞毒性試驗等。

　　二、細(xì)胞免疫水平檢測

　　包括參與細(xì)胞免疫的有關(guān)細(xì)胞數(shù)量、功能和細(xì)胞因子水平的檢測。

　　1.外周血T細(xì)胞及其亞類的計數(shù)：測定T細(xì)胞總數(shù)、CD4+亞群、CD8+亞群及CD4+T/CD8+T比值。在急性移植排斥反應(yīng)臨床癥狀出現(xiàn)前1～5天，CD4+T/CD8+T、細(xì)胞比值可升高至1.2以上，而此比值小于1.08時則懷疑有感染的可能。

　　2.4hT細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗是檢測受者致敏T細(xì)胞的一種方法。該法取外周血單個核細(xì)胞，不經(jīng)培養(yǎng)直接加入3H-TdR，置C02培養(yǎng)箱溫育4小時，是一項預(yù)報急性排斥反應(yīng)危象較為滿意的試驗。

　　3.NK細(xì)胞活性測定：大量免疫抑制劑的應(yīng)用，造成受者機體NK細(xì)胞活性的抑制，但在急性排斥反應(yīng)時明顯升高。

　　4.細(xì)胞因子的測定：IL-1、IL-2、IL4、IL-6、IFN-7和slL-2R等的檢測，已作為監(jiān)測移植排斥反應(yīng)的常用項目。這些細(xì)胞因子的水平均可升高。應(yīng)用免疫標(biāo)記法檢測受者血清中細(xì)胞因子時只能對接受移植物前后的變化進(jìn)行對比分析，僅作參考。血清肌酐值和IL-2R若同時增高，則對急性移植排斥反應(yīng)的發(fā)生有診斷意義。骨髓移植中發(fā)生的GVHR是移植排斥反應(yīng)的特殊類型。臨床實驗室可采用有限稀釋分析法，計數(shù)供者外周血單個核細(xì)胞中分泌IL-2的特異性T細(xì)胞比值。此比值≥1/10萬，判斷為有發(fā)生GVHR的可能;若小于此比值，則提示不發(fā)生GVHR.該法為單向MLC，但又不同于一般的MLC.供者外周血單個核細(xì)胞經(jīng)有限稀釋法稀釋成單個細(xì)胞，然后在體外兩次接受受者細(xì)胞的刺激，即供者外周血稀釋后與20Gy放射性照射的受體外周血單個核細(xì)胞混合培養(yǎng)l4小時，洗去上清液后再加入40Gy放射性照射的經(jīng)EB病毒轉(zhuǎn)化的宿主B細(xì)胞(該細(xì)胞本身并不產(chǎn)生IL-2，但對供者T細(xì)胞具有更強的刺激和誘生IL-2之作用)，經(jīng)24小時培養(yǎng)后，取上清液測IL-2活性。

　　5.粘附分子及其配體的檢測：粘附分子及其配體的表達(dá)與急性排斥反應(yīng)的發(fā)生密切相關(guān)。諸如ELAM-1、VCAM、ICAM和HLA分子等。

　　三、補體水平的檢測

　　在移植物遭受排斥時，補體成分的消耗增加，含量減少。血清總補體和單個補體成分活性或補體的裂解產(chǎn)物，如C3a、C3b、C3d等的測定，對于了解補體的活性很有幫助。檢測方法有：免疫電泳、免疫標(biāo)記技術(shù)等。檢測凝血系統(tǒng)、纖溶系統(tǒng)、激肽系統(tǒng)活性，也有助于補體活性水平的判斷。

　　四、急性時相反應(yīng)物質(zhì)的檢測

　　C反應(yīng)蛋白(CRP)、IL-1、IL-6、TNF-a以及HSP等炎癥分子，在發(fā)生感染和自身免疫性疾病時均有不同程度的增高。同種異基因干細(xì)胞移植時CRP升高，移植后發(fā)生細(xì)菌或真菌感染時CRP增高更為顯著。在肝、腎移植中，CRP的動態(tài)測定結(jié)果與器官移植后并發(fā)癥的發(fā)生相關(guān)，且比白細(xì)胞計數(shù)或發(fā)燒更敏感。CRP的測定尚未作常規(guī)項目，但外科創(chuàng)傷、急性排斥反應(yīng)的發(fā)生以及感染等的關(guān)系，正被認(rèn)可。